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SIGMA蛋白酶K的應用

發(fā)布時間: 2017-06-26  點擊次數: 3494次
SIGMA蛋白酶K采用基因突變技術,對基因進行定點突變后,將其重組到酵母染色體上,利用發(fā)酵技術,通過誘導獲得高活性的重組SIGMA蛋白酶K,通過基因改造后,提高大大提高了酶的活性,SIGMA蛋白酶K是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。
在pH4到pH12的條件下均有活性,在SDS、尿素或EDTA存在時亦很穩(wěn)定。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵,用于生物樣品中蛋白質的降解。此酶經脫色和色譜純化去除了RNA和DNA,也檢測不到其它雜酶活性。
由于蛋白酶K在尿素和SDS中穩(wěn)定,還具有降解天然蛋白質的能力,因而它應用很廣泛,主要用在基因診斷試劑盒、基因組DNA提取試劑盒、RNA提取試劑盒中去除DNA和RNA制備中的核酸酶,也可以于提取組織中非蛋白成份降解含有蛋白質的雜質。
 
SIGMA蛋白酶K應用
SIGMA蛋白酶K的應用主要在實驗室,在生物學實驗中應用廣泛。
(1)尤其適用于DNA、RNA 提取過程中抑制核酸酶;
(2)用于原位雜交,處理組織碎片以保證的探針篩選;
(3)通過修飾細胞膜上的蛋白質和糖蛋白以確定蛋白質在膜上的位置;
(4)準備菌落轉移時除去細胞碎屑;
(5)通過激活細菌自溶因子促進細胞溶解;
(6)為脈沖電場凝膠電泳、RT-PCR等準備無DNase、RNase的樣品;
(7)有助于從組織中線粒體提取;
(8)傳染性海綿狀腦病的研究中用于分解腦組織樣品中的蛋白朊病毒;
(9)指紋印跡。
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