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Invitrogen反轉(zhuǎn)錄酶III主要特點

發(fā)布時間: 2017-05-24  點擊次數(shù): 3911次
Invitrogen反轉(zhuǎn)錄酶III是以RNA為模板指導三磷酸脫氧核苷酸合成互補DNA(cDNA)的酶。哺乳類C型病毒的反轉(zhuǎn)錄酶和鼠類B型病毒的反轉(zhuǎn)錄酶都是一條多肽鏈。鳥類RNA病毒的反轉(zhuǎn)錄酶則由兩上亞基結(jié)構(gòu)。真核生物中也都分離出具有不同結(jié)構(gòu)的反轉(zhuǎn)錄酶。

Invitrogen反轉(zhuǎn)錄酶III缺乏連續(xù)性,因此要獲得像AMV反轉(zhuǎn)錄酶反應(yīng)中產(chǎn)生同樣量的cDNA就要求使用較多單位的Invitrogen反轉(zhuǎn)錄酶III。用1微克的mRNA起始合成*條鏈的cDNA,要用8單位的M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶才相當于1單位的Invitrogen反轉(zhuǎn)錄酶III的作用。
 
Invitrogen反轉(zhuǎn)錄酶III主要特點
Invitrogen反轉(zhuǎn)錄酶III都具有多種酶活性,主要包括以下幾種活性。
①DNA聚合酶活性;以RNA為模板,催化dNTP聚合成DNA的過程。此酶需要RNA為引物,多為色氨酸的tRNA,在引物tRNA3′-末端以5′→3′方向合成DNA。Invitrogen反轉(zhuǎn)錄酶III中不具有3′→5′外切酶活性,因此沒有校正功能,所以由反轉(zhuǎn)錄酶催化合成的DNA出錯率比較高。
②RNase H活性;由Invitrogen反轉(zhuǎn)錄酶III催化合成的cDNA與模板RNA形成的雜交分子,將由RNase H從RNA5′端水解掉RNA分子。
③DNA指導的DNA聚合酶活性;以反轉(zhuǎn)錄合成的*條DNA單鏈為模板,以dNTP為底物,再合成第二條DNA分子。
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